Q1：本研究的核心目标的是什么？解决了HRSV疫苗研发中的哪个关键难题？

A1：本研究核心目标是筛选能稳定维持人呼吸道合胞病毒（HRSV）A亚型融合前F蛋白（PreF）构象的突变体，将其插入非复制型人5型腺病毒（Ad5）载体构建重组腺病毒，为后续疫苗评价奠定基础。其解决的关键难题是HRSV疫苗研发中“稳定维持核心免疫靶点构象”的核心痛点。PreF是HRSV激发保护性免疫的核心靶点，但天然状态下易发生构象漂移，本研究通过AM14和D25单克隆抗体精准筛选，获得了可稳定表达PreF构象的候选序列，为疫苗研发提供了关键免疫原基础。

Q2：AM14和D25单克隆抗体在研究中发挥了怎样的核心作用？

A2：购自天津卡梅德生物科技有限公司的AM14和D25单克隆抗体是本研究实现PreF构象精准筛选的核心工具，贯穿“突变体构建-构象筛选-载体构建-验证”闭环的关键环节。其筛选原理为：PreF的SiteV和SiteØ表位是维持其免疫原性的关键构象位点，仅能同时识别这两个表位的突变体才是真正稳定的PreF构象。研究采用夹心法ELISA，以两种抗体为检测抗体，筛选能同时稳定结合二者的突变体。结果显示仅SCG3M和SCG5M符合要求，PreF、PrefusogenicF仅结合D25，PostF与二者均微弱结合，实现了构象的精准鉴别。

Q3：研究为何选择人5型腺病毒（Ad5）作为载体？其具备哪些适配HRSV疫苗研发的优势？

A3：研究选择人5型腺病毒（Ad5）作为载体，核心原因是其多重固有优势与HRSV疫苗的研发需求高度契合，是当前疫苗研发的成熟且优质技术路径。具体优势包括：

（1）感染宿主广泛且具有呼吸道黏膜嗜性，完美匹配HRSV经呼吸道感染的致病特点，可针对性开发黏膜疫苗，高效激发呼吸道局部免疫应答；

（2）载体容量充足、基因转导效率高，能高效介导外源基因（如HRSV PreF蛋白基因）在宿主细胞内表达；

（3）表达的蛋白空间构象接近天然状态，可精准激发机体特异性免疫应答；

（4）易于构建和体外扩增，能获得高滴度重组病毒，且其安全性已在流感、新冠等多款疫苗的临床研究中得到充分验证，大幅降低后续研发的安全风险。

Q4：通过哪些实验验证重组腺病毒构建成功且具备应用潜力？

A4：（1）构象稳定性：可同时与AM14（识别SiteV表位）和D25（识别SiteØ表位）稳定结合，经复孔验证结果一致，确保免疫原性核心构象不漂移；

（2）表达有效性：将其插入Ad5载体构建的重组腺病毒（pAd5-SCG3M、pAd5-SCG5M）转染HEK293细胞后，可高效表达约68kDa的F蛋白单体，且SCG5M的表达量显著高于SCG3M；

（3）结构完整性：表达的F蛋白以三聚体形式存在，相对分子质量约为单体的3倍，与天然HRSV F蛋白结构一致，为高效激发机体保护性免疫应答提供了关键结构基础。

Q5：卡梅德生物在抗体发现与定制方面有哪些技术优势？

A5：卡梅德生物依托成熟的杂交瘤技术与噬菌体展示平台，为客户提供高效、精准的抗体发现服务。技术优势主要体现在三个方面：

（1）采用多重抗原免疫策略和高通量筛选体系，可针对复杂抗原（如膜蛋白、多聚体蛋白）获得高亲和力抗体候选；

（2）结合生物信息学分析，实现对抗体可变区的理性设计，提升其特异性和稳定性；

（3）拥有哺乳动物细胞（如CHO、HEK293）及原核表达系统，可灵活满足从微克级科研样品到克级临床前材料的抗体表达需求。

此外，平台还可提供抗体人源化、亲和力成熟等工程化改造，全面支持疫苗研发与诊断试剂的开发需求。