传统意义上血清抗体主要包括IgG1，IgG2，IgG3和IgG4 四种亚型，而骆驼主要血清抗体包括IgG1，IgG2和IgG3三种类型，其中IgG1与传统抗体结构相似，含有2条重链和2条轻链；IgG2和IgG3缺少CH1和轻链结构域，因此也被称为重链抗体(heavy Chain Antibody，hcAb)，如图1所示：

图1 经典抗体与重链抗体模式结构

(a) 传统抗体及其Fab/scFv抗体形式 (b) 重链抗体及其VHH抗体形式

重链抗体（单域抗体）在羊驼和骆驼血清中的分部是不均衡的，骆驼血清抗体中重链抗体占比约为60-75%，羊驼血清抗体中重链抗体占比约为40-50%。这种显著的差异导致了构建的骆驼VHH抗体文库（骆驼纳米抗体文库）具有先天的优势，如表1所示。骆驼抗体文库主要是指利用骆驼重链抗体的可变区，即VHH区域序列构建的VHH抗体文库，又叫纳米抗体文库。VHH抗体（单域抗体）的特点是只含有重链抗体的抗原结合区，如图2所示，氨基酸长度约为110AA，SDS-PAGE显示分子量约为15kDa（远小于传统抗体150kDa的分子量），具有较好的稳定性，能够抵抗低pH环境。 同时在VHH人源化改造方面，也具有良好的适应性，容易满足Car-T等免疫细胞的改造和分选实验要求。

图2 骆驼重链抗体与VHH抗体模式

卡梅德科技(KMD Bioscience)能够为客户提供高质量的、骆驼来源的纳米抗体噬菌体展示文库制备服务。我们坚持采用人用疫苗和生物制药的QbD（Quality by Design）设计原则，在理解和尊重ICH原则的基础上，设计并制备骆驼VHH抗体噬菌体展示文库，为客户提供全程可追溯的产品追溯体系和文件支撑体系。VHH抗体噬菌体展示文库包含抗原设计，动物免疫，文库构建与筛选等主要环节。

针对骆驼VHH抗体文库，我们设计了一系列来自于骆驼抗体Fc融合表达的人源免疫检查点蛋白。结合我们成熟的Freestyle 293F和Expi CHO细胞悬浮表达平台，我们能够为客户在较短的周期内从基因合成，载体构建到克级蛋白的表达，更多的服务需求，请咨询我们的蛋白表达平台。同时，根据我们的实验结果，我们发现小分子靶蛋白直接与人源Fc片段融合后免疫效果要好于靶蛋白融合骆驼Fc片段后免疫结果（具体实验结果，请联系我们的技术人员）。

卡梅德科技(KMD Bioscience)的骆驼种群来源于欧洲，公司可以提供未经免疫的，足龄（24-36月龄）的骆驼进行抗原免疫，按照标准免疫方法，每个项目免疫5-6针，免疫期间为客户提供ELISA效价测定服务，保证抗血清ELISA效价合格后采血分离PBMC。

卡梅德科技(KMD Bioscience)采用M13噬菌体的pIII蛋白进行VHH抗体(纳米抗体)表面展示。我们的科学家构建了带有Flag和6*His tag双标签的噬菌体载体，同时制备出了具有10^8转染效率的TG1和XL1-Blue宿主菌感受态，经过2-3次转染与扩增，能够为客户提供有效库容量为10^8-10^9，且包装库容为10^13-10^16/ml颗粒数的高质量纳米抗体展示文库。通过抗原极限施压筛选方式，经过3轮纳米抗体文库淘筛，即可获得多达20-30株具有高亲和力的噬菌体株。通过简单的IPTG诱导，即可在1-2周内获得大量抗体表达产物，以满足客户FACS，细胞活性测试等研究需求。

注：1.客户提供骆驼外周血淋巴细胞，淋巴结细胞或脾脏细胞（保存在RNA later等溶液中，避免RNA降解，蓝冰运输），从第二步开始制备VHH抗体文库，只需3-4周即可完成。

2. 采用TriZol溶液制备细胞裂解物，干冰运输。