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核酸适配体筛选服务

核酸适配体筛选服务介绍

卡梅德科技(KMD Bioscience)依托成熟的配体指数富集系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment, SELEX),可提供一站式核酸适配体体外筛选服务,针对不同类型靶标高通量筛选获得高亲和力、高特异性的核酸适配体,助力客户高效推进研究项目,降低研发成本。

核酸适配体(Aptamer)是一类长度为 20-80 nt 的单链DNA或RNA寡核苷酸序列,可通过分子内折叠形成发夹、G-四链体、假结等精准的三维空间构象,以纳摩尔至皮摩尔级的解离常数(Kd)特异性识别靶标分子,因此也被称为“化学抗体”。其中RNA适配体因核糖2'-羟基的存在,具备更丰富的构象多样性与结合柔性;DNA 适配体则化学稳定性更强、易于化学合成与修饰,二者可根据靶标特性与下游应用场景灵活选择。

目前核酸适配体已广泛应用于生命科学基础研究、临床体外诊断、靶向药物开发与生物传感检测等领域。卡梅德科技可提供从随机文库设计、多轮结合筛选与富集、高通量测序分析到亲和力/特异性验证的全流程服务;除蛋白、小分子等经典靶标筛选外,还支持细胞水平差异筛选(Cell-SELEX)等定制化方案,能够精准识别不同细胞表型的分子特征差异,满足多元化的研究需求。


指数富集法(SELEX)

SELEX是一种体外方法,广泛用于从随机单链核酸序列文库中选择与目标配体特异性结合的单链DNA或RNA(也称为适体)的寡核苷酸。SELEX技术的基本流程主要包括:1)体外化学合成随机单链寡核苷酸初始文库;2) 将随机文库与靶标分子共同孵育,形成核酸- 靶标复合物混合;3) 洗去未与目标配体结合的核酸分子;4) 洗脱结合的适配体;5) 通过 PCR方法扩增结合的适配体以生成二级文库用于下一轮筛选;6)重复步骤2)-5),获得与目标配体具有高亲和力和高特异性的适配体,快速筛选出候选靶分子。

卡梅德科技依托成熟的SELEX技术平台,可针对蛋白质、多肽、小分子、完整细胞等多类型靶标提供适配体筛选服务,高效获得候选适配体分子。客户仅需提供靶标蛋白、对应基因序列或序列编号,我们即可完成靶标蛋白的SDS-PAGE质控、核酸文库制备、多轮循环筛选、NGS测序分析及候选适配体合成的全流程实验。


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 图1 SELEX方法的典型程序


服务范围

卡梅德科技提供的服务包括:

--用于适体开发的基于蛋白质的SELEX 服务

--用于适体开发的基于全细胞的SELEX服务

--用于适体开发的基于活体动物的SELEX服务

--双适配体配对开发服务

服务内容

服务项目

内容

周期

文库筛选

* 靶标孵育、结合序列洗脱和扩增;

重复以上步骤6~8轮(特别情况增加筛选轮次)

6-8周

NGS测序

* 利用NGS测序、生物信息学和生物物理方法获取候选序列的信息

2周

适配体合成

* 通过HPLC进行高质量适体合成和纯化,并提供MS报告

1周

修饰

* 不同的需求和应用选择了不同的改性方法,如生物素、5'-NH 2、5'-硫醇、荧光染料等

2周

亲和力测定

* BLI、SPR等技术,用于KD测定

1周


客户提供

样品

样品要求

蛋白

* 不含大标签;缓冲液无游离氨基;PBS缓冲液,不含Tris;纯度>95%

* 蛋白0.5-1mg,浓度1mg/ml

小分子物质

* 水溶性好>1mM

* 稳定:不易氧化,不易分解等

* 稀释热不易过高

* 纯度>95%

* 样品量不少于10mg

细胞与细菌

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交付内容

--交付完整的实验报告以及客户指定的适配体序列

服务优势


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