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动物基因敲除服务
动物基因敲除服务介绍

模式动物是生物学家通过研究特定动物来揭示普遍生命现象的工具。它们是经过人工培育,遗传背景明确的实验动物。模式动物包括野生型和基因修饰动物等类型。斑马鱼具有胚胎透明,便于观察、基因操作简便等特点,常用于模拟人类疾病。

条件性基因敲除技术基于Cre/LoxP系统,通过Cre重组酶识别LoxP位点并介导DNA重组,实现特定时间和空间的基因敲除。通过将“LoxP-floxed ”小鼠与Cre转基因鼠杂交,可以在特定组织或细胞中敲除靶基因。

基于CRISPR-Cas9技术,获得基因敲除动物时间大大缩短,只需4-6个月便可获得。其原理是通过显微注射法将Cas9蛋白和sgRNA注射到动物的受精卵中,Cas9蛋白在sgRNA的引导下对目标基因进行切割,引发细胞的DNA修复机制。如果细胞通过非同源末端连接(NHEJ)进行修复,往往会引入插入或缺失突变,导致目标基因功能丧失。随着受精卵的发育,这些突变会传递给后代,从而产生基因敲除动物。

动物

疾病模型

小鼠

肿瘤(肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌等)、代谢(肺纤维化、糖尿病模型、肥胖模型)、抑郁症模型;

兔

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型、偏头痛模型、帕金森模型、老年痴呆模型;

猪

糖尿病模型、早衰症模型、佝偻病模型、脑出血模型、脊髓胶质瘤模型、脑胶质模型;


内容

步骤

服务内容

周期

Step1 sgRNA设计

(1)客户提供目标基因;

(2)生信分析,确定靶标位点,根据PAM位点设计靶序列,其末端加上酶切位点;

(3)合成sgRNA序列;

1天

Step2 CRISPR Cas9相关载体构建载体

(1)合成的sgRNA序列拼接到载体上;转化宿主菌,测序验证;

1-2月

Step3 载体共转染细胞

(1)细胞接种;

(2)质粒稀释;

(3)制备质粒-转染试剂复合物;

(4)sgRNA载体、Cas9载体、荧光报告载体共转染细胞;

(5)流式分选单克隆细胞;

咨询

Step4 体外转录

(1)细胞基因组提取;

(2)sgRNA、cas9转录模板制备;

(3)sgRNA、cas9 mRNA体外转录;

1周

Step5 动物细胞超数排卵与显微注射

(1)雌激素、性腺激素处理雌性动物,收集受精卵;

(2)sgRNA与cas9mRNA混合注射到受精卵细胞质;

咨询

Step6 F0突变检测

(1)酶切测序验证突变;

1周


流程

动物基因敲除实验流程-卡梅德科技.jpg

优势

动物基因敲除服务优势-卡梅德科技.png

常见问题解答

1.动物基因敲除通常使用什么方法?

答:对于动物基因敲除,通常采用受精卵显微注射的方法。将Cas9蛋白和sgRNA混合,通过显微注射到动物的受精卵中。随着受精卵的发育,这些突变会传递给后代,从而产生基因敲除动物。

2.CRISPR Cas9基因敲除技术有哪些优势?

答:操作相对简单,可以快速实现对特定基因的敲除;同时,能够精确控制敲除的基因位点,减少脱靶效应;此外,该技术还具有成本低、实验周期短等优点。

3.如何评估CRISPR Cas9基因敲除实验的成功率?

答:基因组测序,通过测序结果与目标基因序列的对比,可以判断敲除是否成功以及敲除的效率。此外,还可以观察敲除后动物的表型变化来间接评估敲除效果。

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