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牛单B细胞单抗制备服务

牛单B细胞单抗制备服务介绍

牛单B细胞单抗制备服务基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备,利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性,从动物的淋巴组织中收集B细胞,通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因,从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群,然后选择抗体生产宿主,使其产生抗体。

牛单B细胞单抗制备技术原理

牛单B细胞技术具体特异性强,批次间差异小等特点,由该方法制得的牛单克隆抗体是常用的单克隆抗体。目前,牛单B细胞技术制备的抗体在生物医学研究、诊断工具和治疗药物研发等方面有广泛应用。


牛单B细胞单抗制备服务流程

①动物免疫、PBMC分离。选择牛作为实验动物,并通过注射目标抗原(通常是目标蛋白或多肽)来激发免疫反应,免疫牛4-5次,以此激活牛的免疫系统,导致B细胞产生抗体。然后进行ELISA效价测定、免疫牛外周血采集和PBMC分离。

②流式分选。用PBMC流式分选方法来分选抗原特异性的单个B细胞。

③单B细胞培养筛选。将分选的单个B细胞先在体外进行5~20板96孔板单B细胞培养,然后将细胞培养的上清进行ELISA筛选或者FACS等前期介入检测。

④阳性克隆测序。挑选检测的至少20个阳性细胞克隆进行RT-PCR,来扩增其抗体可变区基因,然后进行测序。

⑤载体构建、抗体表达纯化。最后进行抗体的哺乳表达载体构建、细胞转染和ELISA验证。

牛单B细胞单抗制备服务流程.png

牛单B细胞单抗制备服务内容

步骤

具体内容

周期

抗原准备与动物

* 注射抗原,进行5-7次免疫
* 收集血清,ELISA检测血清效价

* 提供详细的免疫报告

10-14周

细胞分离

* 收集免疫后的牛血进行细胞分离
* 分选抗原特异性免疫细胞
* cDNA文库构建

1-2周

基因扩增

* PCR扩增目的基因
* 测序

4-5周

融合抗体表达

* 载体构建
* 融合抗体表达
* 阳性克隆筛选

6-7周

功能验证

* SPR/BLI验证

1周


牛单B细胞单抗制备服务交付内容

--所有单克隆抗体超长CDR3H序列信息及原始数据

--来自血液、淋巴和脾细胞的B细胞(>5x10^6/项目);cDNA文库,3-4瓶/项目

--构建完成的表达载体

--高纯度融合抗体(>90%)

--实验报告和原始数据:包括SDS-PAGE、ELISA检测等结果,并根据客户需求,提供抗体验证结果,如Western Blot、SPR等


牛单B细胞单抗制备服务优势

--PM级亲和力与高特异性

--序列多样性

--多种抗体表达验证选择

--高细胞融合存活率:保障实验成功率。

--严格的QC体系与标准化操作流程:确保交付抗体质量可靠。

--多样化的抗体纯化技术与方案:满足不同纯度和规模要求。

--多样化抗原免疫:接受蛋白、多肽及各类小分子抗原,提供从抗原制备到抗体生产的一站式服务。

--多样化抗体检测方法:提供ELISA、WB、SPR/BLI等抗体质量检测技术,可全面评估抗体质量。

--完善的平台:拥有成熟的抗体和蛋白平台,多种表达系统可选,多种免疫途径,并同步实验,确保单抗高质量产出。

--完整的结果分析:提供包含详细实验过程的完整报告。

--定制服务:提供个性化定制服务,满足客户的实际需求。

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