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羊驼单B细胞单抗制备服务

羊驼单B细胞单抗制备服务介绍

卡梅德科技(KMD Bioscience)多年来致力于抗体制备研究,拥有从业经验丰富的技术团队、成熟稳定的工艺体系与完备的抗体制备实验设备,可提供小鼠、兔、羊驼、牛、羊、鸡等多物种来源的重组单克隆抗体制备服务。

羊驼拥有独特的双重抗体免疫体系,可同时产生含轻重链的常规IgG抗体与天然缺失轻链的重链抗体(其可变区即VHH单域抗体)。依托单B细胞技术,可直接从分选获得的抗原特异性羊驼单个B淋巴细胞中,经PCR扩增获取抗体可变区编码基因,完整保留体内免疫应答形成的天然序列配对与抗体多样性。相较于杂交瘤、噬菌体展示等传统抗体制备技术,单B细胞抗体制备技术具备研发周期短、筛选通量高、抗体特异性强的核心优势,是当前重组抗体开发领域的前沿技术路线。


羊驼单B细胞单克隆抗体制备

羊驼体内天然存在两种类型的抗体:(i)是由两条重链与两条轻链组装形成的经典四聚体 IgG 抗体,以及(ii)为天然缺失轻链及重链CH1结构域的重链抗体(heavy chain antibody, hcAb),仅由两条重链通过二硫键构成同源二聚体结构。重链抗体的重链可变区为独立的单结构域功能单元,专属命名为 VHH,也就是常说的纳米抗体或单域抗体(single domain antibody, sdAb)。相较于传统全长抗体,羊驼源抗体尤其是VHH单域抗体理化稳定性更强,基因工程改造操作更便捷,抗原识别特异性优异,可在原核及真核表达系统中实现高效重组表达。同时,VHH的氨基酸序列与人源抗体重链可变区VH3家族具有高度同源性,更易于进行人源化改造,目前已广泛应用于抗体药物研发领域。

单B细胞抗体制备技术是近年发展成熟的新一代抗体发现技术。卡梅德科技依托该技术平台,从免疫后羊驼的外周血或免疫淋巴器官中分离淋巴细胞,通过流式分选技术精准富集并分离抗原特异性单个B淋巴细胞;可根据项目需求开展单细胞体外培养,通过培养上清的抗原结合实验鉴定抗体的结合特异性。后续通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)搭配抗体特异性引物,扩增获得抗体可变区编码基因,将目的基因定向克隆至表达载体后,可在客户指定的表达系统中完成重组抗体的表达与纯化;最终纯化产物通过ELISA等方法完成抗原结合活性验证。凭借标准化的技术流程与成熟的开发体系,我们交付的羊驼源单克隆抗体性能稳定,项目整体开发成功率高。

羊驼单B细胞单抗制备服务抗体图1.png

图1 A,传统IgG;B,传统抗体Fab片段;C,传统抗体的单链Fv片段;D,重链抗体或驼类抗体;E,驼类抗体的VH区域或单域抗体(sdAb)


羊驼单B细胞单克隆抗体制备流程


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羊驼单B细胞单克隆抗体制备服务内容

步骤

服务内容

交付材料

周期

抗原制备(可选)

半抗原改造/完全抗原制备

改造产物及鉴定结果

具体分析

动物免疫

抗原乳化,免疫羊驼4-5次;

ELISA效价测定;

抗血清采集

免疫血清;

ELISA检测结果;

实验记录

8-10周

B细胞富集和筛选

PBMC分离;

流式分选抗原特异性单个B细胞、阳性克隆ELISA初筛验证;

高通量筛选结果报告,

覆盖多样序列的抗原特异性B细胞;

ELISA阳性筛选结果;

6-8周

B细胞抗体测序

RT-PCR;

高通量测序

测序原始数据;

特异性序列

1周

抗体表达与纯化(可选)

抗体小规模转染或放大

表达质粒,纯化抗体

具体分析


羊驼单B细胞单克隆抗体制备服务优势


羊驼单B细胞单抗制备服务优势.png

样品要求

客户提供

要求

重组蛋白

* ≥3.5 mg,要求蛋白纯度>85%,蛋白要求分子量大于10 kDa,可溶性蛋白浓度在0.5~5mg/mL之间。若要求抗原亲和纯化,需额外提供15 mg左右重组蛋白

多肽与小分子

* 裸肽≥15mg,多肽纯度>90%,不少于10个AA,偶联KLH/BSA/OVA或其他载体蛋白;小分子需要预先对结构进行评估


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