稳定细胞株又称稳转细胞株，指的是通过基因工程手段获得的持续稳定过表达或者干扰特定基因表达的细胞株。稳定转染（又称稳转）旨在将外来DNA整合到宿主基因组中以便于永久改变细胞的遗传组成。稳转细胞株的主要优势在于它能够在较长的时间内维持基因表达的一致性。基于这个优势，稳转细胞株应用范围广，比如重组蛋白和抗体生产、基因编辑、功能性研究等，且经稳转细胞株生产的生物制品批间差小。

稳定细胞株构建技术路线包括基因合成、慢病毒载体的构建、慢病毒包装及生产、病毒感染宿主细胞、抗生素筛选阳性克隆、单克隆筛选、稳转细胞株鉴定。

稳定细胞株构建技术路线

1.基因合成：根据客户提供的靶标信息及序列进行目标序列的合成。

2.慢病毒载体构建：根据客户需求将目的基因克隆到相应的慢病毒载体上，实现基因敲减（KD）、基因过表达（OE）、基因过表达（Cas9-SAM）、基因定点敲除（KO）和基因定点敲入（KI）等。

3.慢病毒包装及生产：将构建好的慢病毒载体（含有目的基因）与其他病毒包装相关蛋白质粒一同转染到HEK 293细胞中，进行慢病毒生产。

4.病毒感染宿主细胞：将生产的慢病毒进行浓缩及滴度鉴定，并用其感染客户想要的宿主细胞系。

5.抗生素筛选阳性克隆：慢病毒载体中含有相应的抗生素抗性基因，所以用含有对应抗生素的培养基进行阳性克隆的筛选。

6.单克隆筛选：用倍比稀释的方式将以上细胞进行稀释并接入到96孔板中进行培养，选取单个细胞形成的细胞团继续放大培养。

7.稳转细胞株鉴定：用FAC、WB或qPCR的方式鉴定单克隆的蛋白表达情况。

卡梅德生物会根据客户的需求定制所需的个性化服务。

1.CRISPR/Cas9是目前使用广泛的基因编辑技术，基因编辑有效精准，操作便捷，可进行多重靶向敲减。

2.我们拥有成熟的IOS重组技术，可以实现定点整合和非随机整合，稳定遗传，传代过程中，基因不会丢失；还可同时整合多个基因，实现多基因共表达。