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无细胞蛋白表达服务
无细胞蛋白表达服务介绍

无细胞蛋白表达技术是一种在活体细胞外重建蛋白质合成机制的体外表达技术。该技术利用含有转录与翻译所需全部分子机器(如 RNA 聚合酶、核糖体、tRNA、各类酶及辅因子)的细胞提取物,补充外源添加的氨基酸、核苷酸和能量再生系统,构建一种可调控的生化反应体系。向该体系引入编码目的蛋白的DNA或mRNA模板后,体系可在数小时内自主完成从转录到翻译的完整流程,直接生成目标蛋白质。

该技术省去了细胞培养及转染环节,具有周期短、操作灵活、可表达毒性蛋白等特性,且易于引入非天然氨基酸,在高通量筛选、药物开发及合成生物学研究中应用广泛。无细胞蛋白表达系统可满足科研人员对蛋白快速高效高难度体外重组表达的需求,适用于毒性蛋白、膜蛋白以及含有非天然氨基酸的工程化蛋白等类型。

卡梅德科技已搭建了完备的无细胞蛋白表达平台,涵盖大肠杆菌提取物系统、小麦胚芽提取物系统与兔网织红细胞系统等,可灵活满足不同复杂程度蛋白的表达需求。搭配我们设计优化的高表达线性模板与环状质粒(可搭载 T7、SP6 等高效启动子及优化后的 UTR 序列),可为客户提供从微升级筛选到升级级生产的全流程服务。


无细胞蛋白表达实验流程

无细胞蛋白表达服务-卡梅德生物-1.png

无细胞蛋白表达实验步骤

步骤

服务内容

周期

表达载体构建

* 密码子优化,基因合成(或基因模板扩增)

* 将目的基因亚克隆至含T7/SP6等强启动子的无细胞表达载体

* 拼接序列验证:测序

* 交付:构建正确的重组表达质粒、菌株及测序原始报告

1-2周

无细胞反应体系建立与表达

* 高活性细胞提取物(大肠杆菌/小麦胚芽/兔网织红细胞)制备与质检

* 优化反应缓冲体系配制(能量再生系统、氨基酸、辅因子等)

* 将验证模板与反应体系混合,在最佳温度下进行体外合成孵育

1-2周

产物检测与初步分析

* 表达产物取样:进行SDS-PAGE电泳初步检测

* 使用Western Blot 进行特异性确认

* 可选:活性/功能性快速检测(如荧光强度、酶活测定)

1-2周

蛋白质纯化与质控

* 基于亲和标签(如His-Tag、GST等)进行层析纯化

* 纯度鉴定:SDS-PAGE纯度分析

* 浓度测定与最终产品分装

1-2周


无细胞蛋白表达服务优势

无细胞蛋白表达服务-卡梅德生物-2.png

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