卡梅德生物（KMD Bioscience）聚焦分子互作分析领域的技术研发，凭借自主研发的等温滴定量热技术（ITC）平台与由资深科学家领衔的检测团队，致力于为客户提供高精准度、高可靠度的生物分子互作分析服务。我们运用的 ITC 技术是可在溶液体系中直接测量生物分子间相互作用热力学参数的金标准检测方法，能实时追踪分子结合过程中的热量释放与吸收变动，精准测定蛋白质、核酸、小分子化合物等各类生物分子间的结合亲和力（KD 值）、化学计量比（n）、焓变（ΔH）及熵变（ΔS）等关键热力学参数。
ITC技术不需要标记、不需要固定即可直接在天然溶液环境中进行测量，凭借其显著的优势，已广泛应用于药物研发、抗体分析、信号通路机制探究等多个领域。卡梅德生物提供从实验设计、样品处理、分子互作检测到数据分析的一站式服务，能够支持客户完成从简单结合验证到复杂相互作用热力学剖析的全方位需求。
图1 ITC技术原理
ITC仪器包含参比池和样品池，其中参比池中加入稀释溶液作为对照，彼此通过绝热装置隔开。在恒温条件下，注射器中的药物溶液滴定到含有目的蛋白的样品池中，两种物质相互作用，释放或吸收的热量与结合量成正比。
ITC技术的核心原理是通过调整样品池和参比池之间的功率差异（DP）来维持零温度差异（ΔT≈0）。当配体注入样品池中后，如果其可以与大分子相结合，便会释放或吸收热量，导致温度的变化，系统便可通过调节加热器的功率来维持恒定温度，从而测量出反应热。
随后，利用专业软件对结合等温线进行非线性最小二乘法拟合，基于结合模型计算出KD值、n、ΔH和ΔS等一系列关键参数，从而准确表征分子间互作亲和力与动力学参数，更可深入揭示分子互作背后的驱动力。
ITC亲和力测定结果的核心是对原始热功率图及积分后的结合等温线进行模型拟合与分析。上方峰图为每次注入配体时产生的热流信号，下方为积分后得到的摩尔焓变与摩尔比关系图。
一条典型的ITC结合等温线呈“S”形特征：
1．在初始滴定阶段，配体浓度较低，所有注入的配体均与蛋白结合，释放或吸收的热量较为一致；
2．随着滴定进行，蛋白结合位点逐渐饱和，热信号逐渐减小；
3．当蛋白结合位点完全被占据后，热信号回归基线，表明结合达到饱和。
通过非线性拟合，可准确计算KD值，KD值越小，表明分子间的亲和力越高。n可以揭示结合位点的数量，而ΔH和ΔS分别反映的是结合过程中氢键和范德华力的变化以及疏水作用和构象变化，有助于理解相互作用的驱动力。如果拟合曲线与实验数据偏差较大，提示着可能存在着多个结合位点、协同效应或非特异性结合等复杂情况，需要进一步实验分析。
1. 无需标记与固定：在天然溶液状态下直接测量，最大程度保持分子天然活性。
2. 提供全面热力学参数：一次性获得KD、n、ΔH、ΔS，深入理解结合机制。
3. 高准确性：是测量生物分子互作亲和力和热力学的金标准方法。
4. 广泛适用性：可用于蛋白质、核酸、小分子、脂类、离子等各类生物分子的互作研究。
5. 样品无需固定化：免去化学修饰或固定步骤，减少样品制备复杂性。
6. 检测范围广：可测量解离常数从nM至mM级别。
样品类型 | 一般要求 |
蛋白样品 | 浓度通常为10-100 μM（取决于亲和力强弱），体积≥200 μL，纯度>95% |
配体（小分子/核酸） | 浓度通常为蛋白浓度的10-20倍，溶解于与蛋白相同的缓冲液中 |
缓冲液 | 避免使用高浓度还原剂（如DTT，可使用TCEP），注意缓冲液匹配以避免稀释热干扰 |
样品消耗量 | 每次测定约消耗1-2 mL样品（包括滴定剂和池中样品） |
--专业的技术团队和丰富的技术经验
--检测效率高，无需标记、实时监测
--先进的仪器设备
--应用范围广泛：可用于蛋白、核酸、多肽、纳米材料等分子互作分析
--提供真正的一站式服务：提供从亲和力测定服务，到分子互作研究的一体化解决方案
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