Q1: 客户需要提供什么材料才能开始项目？

       A: 您需要提供包含您目的基因的质粒，或者准确的基因序列信息（如NCBI登录号或序列文件）。如果您有特定的启动子、标签或载体骨架要求，请一并告知。我们的技术团队会协助您完成载体构建的评估和设计。

Q2: AAV和腺病毒最主要的区别是什么？如何选择？

A: AAV和腺病毒核心区别在于基因表达时长和免疫原性。

（1）AAV适用于需要长期、稳定基因表达（数月至数年）的实验，如体内基因治疗研究、动物模型构建。其免疫原性低，安全性高，但表达有延迟。

（2）腺病毒适用于需要快速、高水平瞬时表达（1-2周）的实验，如体外细胞功能研究、疫苗开发。其感染效率极高，但会引发较强的免疫反应。

客户可根据实验目的（长期/短期表达、体内/体外实验）来选择最合适的工具。

Q3: 什么是MOI？

A: 在微生物学中， MOI是病原体(如噬菌体或病毒、细菌等)与感染目标(如细胞)的比率。对于病毒， MOI是病毒颗粒数量与特定空间中存在的目标细胞数量的比率。通常可将某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。

 Q4：用于病毒感染的细胞接种量是多少？   

A: 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后3天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。

（1）对于大部分细胞系，传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右；

（2）对于某些原代细胞，由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%-60%，但要确保在感染后3天时细胞汇合度达到90%-100%；

（3）对于非分裂细胞，如神经元细胞，接种后不再增殖，此时可以按照80%的汇合度进行接种。

Q5: 如果病毒感染效率不理想，可能是什么原因？

A: 感染效率受多种因素影响，包括：

（1）细胞类型: 某些细胞对特定病毒的天然感染效率较低；

（2）病毒剂量（MOI值）: 剂量可能不足，需进行MOI梯度实验摸索；

（3）细胞状态: 细胞生长状态不佳会严重影响感染效率；

（4）感染操作: 如聚醚醚（Polybrene）是否正确使用等。

Q6：如何提高病毒对细胞的感染效率？   

A：病毒对细胞的感染效率受细胞自身生长的状态、细胞数量、细胞被病毒感染的难易程度等多个因素影响。因此，选择细胞生长状态良好、轮廓清晰、合适的细胞密度可以更好的保证感染效率。对于悬浮细胞，可采用离心感染方法，减少病毒感染时的体积，从而提高感染效率。

 Q7：细胞能被病毒感染，但为何GFP荧光很弱？

A：GFP病毒感染细胞后，细胞中荧光强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞本身的增殖状态、细胞类等因素。在增殖较慢的细胞中感染病毒后，GFP蛋白表达达到峰值需要较长的时间。

 Q8：如何确定所用的目的细胞是否可以被腺病毒感染？

A：腺病毒有广泛的宿主范围，它可以感染人类或者其他哺乳动物细胞系或原代细胞，包括可分裂的和不可分裂的细胞。只有少数细胞系不被感染，例如一些淋巴细胞系对腺病毒有更强的抵抗性。为了确认所使用的目的细胞是否能够被腺病毒感染，需要通过带有标记（如GFP）的腺病毒对目的细胞进行预实验。

 Q9：腺病毒载体在体外实验中应注意哪些问题？   

A：由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同，可以通过预实验来判断目的细胞中的腺病毒用量。病毒感染细胞的最佳时期是细胞处于对数生长期时，因此，在细胞消化后12-24小时加入病毒。病毒感染时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。一般感染腺病毒24小时后就能检测到目的基因的表达，48小时表达达到较高水平。

Q10: 交付的病毒可以用于体内实验吗？

A: 可以。我们提供的病毒经过严格的无菌、支原体和内毒素检测，纯度符合体内注射标准。为确保实验成功，请在下单前告知我们您的动物种类、注射部位和剂量，以便我们为您推荐最合适的病毒类型、血清型和滴度。