肿瘤靶点 B7‑H3（CD276）的研究进展、技术难点与开发前景

一、介绍

CD276 又称 B7H3，是 B7 家族跨膜免疫检查点蛋白，在肺癌、乳腺癌、胶质瘤、胰腺癌等多种恶性肿瘤细胞表面高表达，而在绝大多数健康组织低表达，高表达 CD276 往往提示患者预后不良[1]。CD276 既能够抑制 T 细胞、NK 细胞的抗肿瘤免疫应答，介导肿瘤免疫逃逸，还参与肿瘤增殖、侵袭转移、血管生成与耐药产生，兼具免疫调控与非免疫促癌功能[2]。

针对 CD276 的单抗是该靶点药物开发的主流方向，通过制备靶向 CD276 的单抗，可以阻断抑制信号，介导 ADCC 杀伤肿瘤细胞。但靶向 CD276 的单抗开发依旧面临受体未知、抗原糖基化干扰、肿瘤异质性等问题。

二、技术原理与实验流程

CD276 在肿瘤细胞表面高表达，可抑制 T 细胞、NK 细胞活性、诱导巨噬细胞 M2 极化，形成免疫抑制微环境，助力肿瘤免疫逃逸，同时促进肿瘤增殖、迁移及耐药。靶向 CD276 单抗可阻断其免疫抑制信号，恢复机体抗肿瘤免疫，同时借助 Fc 段介导 ADCC、ADCC 效应清除肿瘤细胞，还可作为骨架开发 ADC、双抗等新型药物[1,3]。

靶向 CD276 的单抗常规开发流程：

①抗原制备：构建 CD276 胞外区表达载体，完成重组蛋白表达、纯化，获得接近天然构象的抗原；

②动物免疫或文库筛选：采用动物免疫结合单 B 细胞技术，或噬菌体展示文库筛选，获得靶向 CD276 的候选抗体克隆；

③初筛与复筛：通过 ELISA、流式筛选可特异性结合 CD276 抗原与 CD276 阳性肿瘤细胞的单抗；

④分子改造：开展人源化、Fc 改造，提升亲和力与效应功能；

⑤功能验证：评估单抗阻断活性、ADCC 杀伤能力，开展细胞水平与体内动物模型药效评价。

三、技术优势与现存难点

1.CD276 作为肿瘤靶点的优势

①CD276在广泛实体瘤高表达，正常组织表达有限，靶向 CD276 的单抗具备较好的治疗窗口，适用瘤种范围广。

②CD276表达独立于 PD‑L1，对于 PD‑1/PD‑L1 抑制剂耐药的肿瘤，CD276 依旧是有效肿瘤靶点，可弥补现有免疫治疗的不足。

③以单抗为基础，可以灵活拓展 ADC、双特异性抗体、CAR‑T 等多种药物形式，开发路径丰富。

④组织样本中CD276表达水平可作为预后标志物，用于病人分层筛选。

2.主要难点

①CD276 的完整生理受体尚未完全明确，单抗的作用机制解析存在障碍，难以精准评估阻断活性[4]。

②CD276 存在高度糖基化修饰，糖基化会遮蔽关键表位，容易筛选得到识别糖基化的非功能性单抗。

③肿瘤异质性强，同一肿瘤组织内 CD276 表达分布不均，部分肿瘤细胞阴性，单纯单抗治疗易出现耐药。

四、技术主流应用场景

1.治疗性单抗及衍生药物开发

靶向 CD276 的单抗经过 Fc 改造增强 ADCC 活性，用于实体瘤治疗；以该单抗为载体构建 ADC 药物，实现毒素定向递送，目前多个 CD276ADC 进入临床研究，在小细胞肺癌、三阴性乳腺癌展现出潜力。

2.双特异性抗体与细胞治疗

构建靶向 CD276 的双特异性抗体，桥接肿瘤细胞与 T 细胞，重定向免疫杀伤；同时开发 CD276 靶向 CART，用于实体瘤的临床前研究，拓展该肿瘤靶点的治疗手段。

3.诊断与生物标志物检测

制备抗 CD276单抗，用于 IHC、免疫荧光检测，评估肿瘤组织 CD276 表达水平，实现患者分层，指导靶向用药；也可用于 PET 影像探针，实现肿瘤活体成像诊断。

4.基础机制研究

利用 CD276 抗原与特异性单抗工具，开展肿瘤免疫逃逸、转移耐药相关机制研究，挖掘该肿瘤靶点上下游调控通路，为新药研发提供理论依据。

五、天津卡梅德生物相关技术服务

1. 抗原制备：完成 CD276 胞外区重组蛋白表达、纯化，提供高纯度、接近天然构象的抗原，满足免疫、筛选与检测需求；

2. 单抗筛选：可采用兔单 B 细胞、杂交瘤、噬菌体展示多种技术路线，筛选靶向 CD276 的特异性单抗；

3. 抗体分子改造：完成抗体测序、人源化、Fc 修饰，优化亲和力与效应功能；

4. 多维度功能验证：ELISA、流式细胞术验证结合活性，开展 ADCC 功能评价、IHC 检测，完成细胞水平药效评估；

5. 样品交付：交付重组抗原、抗体质粒、纯化单抗、完整实验报告，支持后续 ADC、双抗分子进一步改造。

常见问题

Q：筛选得到多条结合 CD276 蛋白的单抗，但在 CD276 阳性肿瘤细胞流式实验中几乎无结合，主要是什么原因？

①CD276存在大量糖基化修饰，筛选得到的单抗识别重组蛋白上的糖链，而非蛋白本身表位，肿瘤细胞上糖基化模式存在差异，因此无细胞结合信号。

②重组抗原只保留胞外区片段，抗原空间构象与细胞膜上天然 CD276 构象存在差异，单抗识别重组蛋白特有表位。

③肿瘤细胞表面 CD276 表达水平偏低，检测灵敏度不足。

④缓冲条件影响抗原‑抗体结合。

解决思路：优先使用细胞水平开展复筛，选用去糖基化抗原辅助验证，确认单抗识别蛋白肽段表位，排除糖结合克隆。

参考文献：

[1]Guo Y, Wang X, Zhang C, et al. Tumor Immunotherapy Targeting B7-H3: From Mechanisms to Clinical Applications. Immunotargets Ther. 2025;14:291-320. Published 2025 Mar 27. doi:10.2147/ITT.S507522

[2]Getu AA, Tigabu A, Zhou M, Lu J, Fodstad Ø, Tan M. New frontiers in immune checkpoint B7-H3 (CD276) research and drug development. Mol Cancer. 2023;22(1):43. Published 2023 Mar 2. doi:10.1186/s12943-023-01751-9

[3]Lutz MS, Wang K, Jung G, Salih HR, Hagelstein I. An Fc-modified monoclonal antibody as novel treatment option for pancreatic cancer. Front Immunol. 2024;15:1343929. Published 2024 Jan 22. doi:10.3389/fimmu.2024.1343929

[4]Jansen L, Wienke J, Molkenbur R, Rossig C, Meissner R. B7-H3 in the tumor microenvironment: Implications for CAR T cell therapy in pediatric solid tumors. Cancer Metastasis Rev. 2025;44(4):77. Published 2025 Oct 11. doi:10.1007/s10555-025-10294-y